2019版药用塑料瓶细胞毒性检查法草案公示

药用塑料瓶细胞毒性检查法系将供试品或供试品液接触细胞，通过对细胞形态、增殖和抑制影响的观察，评价供试品对外细胞的毒性作用。

药用HDPE瓶

试验用细胞 推荐使用小鼠成纤维细胞L-929。试验时采用传代48~72h生长旺盛的细胞。

试验前的准备 与样品及细胞接触的所有器具均需无菌。必要时可采用湿热灭菌和115°C保持30分钟；干热灭菌如250度保持30分钟或用180度保持2h。

供试品液的制备 提取介质的选择宜反映出提取的目的，优先选用含血清哺乳动物细胞培养基础作为提取介质。除另有规定外，按品种项下规定的提取介质制成供试品液。将供试品切成0.5cmX2cm条状，用湿热灭菌或紫外线照射消毒后，置玻璃容器内。除另有规定外，按表1选择提取比例，使提取液浸没供试品，按表2选择提取条件（若采用含血清培养基，应用（37±1）度的条件）。

1、相对增殖度法

阴性对照液制备 为不加供试品的细胞培养液。

阳性対照液制备 取生物毒性参比物质，照供试品制备项下的规定进行，如6.3%苯酚的细胞培养液。

检查法 取33个培养瓶，分别加入4X10⁴个/ml浓度细胞悬液1ml，细胞培养液4ml，置（37±1）度，（5±1）%CO₂条件下培养24h。培养24好后弃原培养液。

阴性对照组：取13个培养瓶加入5ml含50%供试品液的细胞培养液，置（37±1）度，（5±1）%CO₂的条件下继续培养7天。

细胞形态学观察和计数；在更换细胞培养液的当天，取3瓶阴性对照组，并在更换后第2、4、7天，每组各取3瓶进行细胞形态观察和细胞计数。

毒性评定 细胞形态分析标准按表3规定

根据各组织细胞浓度按下式计算细胞相对增殖度（RGR）：

结果评价  试验组相对增殖度（以第7天的细胞浓度计算）为0级或1级判为合格。试验组相对增殖度为2级，应结合形态综合评价，轻微毒或无毒的判为合格。试验组相对增殖度为3级~5级判为不合格。